PRÁCTICA: FROTIS DE SANGRE

Práctica realizada en laboratorio por Víctor Amorós e Isabel González

1. INTRODUCCIÓN TEÓRICA

La sangre es el líquido circulatorio de vertebrados y anélidos, y se encarga de transportar a todas las células del cuerpo nutrientes y gas oxígeno, y de recoger sus sustancias de desecho y dióxido de carbono. En el caso del primer grupo de animales, presenta diversas células inmersas en un líquido: el plasma, por lo que también se considera un tejido. Los elementos de la sangre están explicados con detalle en esta entrada del blog:

http://anatomiaaplicadaamoros.blogspot.com.es/2018/01/la-sangre-y-sus-componentes.html

La técnica de laboratorio para observar las células de la sangre utilizada en esta práctica es el frotis. Este consiste en la colocación de una gota de cualquier fluido en un portaobjetos, para luego el posterior arrastre mediante un objeto de borde plano sobre este (en este caso un cubreobjetos), con el fin de crear una fina película del fluido por la que puede pasar la luz, y así facilitar su observación. La muestra debe secarse al aire, evitando soplidos para no contaminarse.

Aunque en laboratorios más especializados se utiliza el método de centrifugación, que separa células del medio líquido y las presenta con más facilidad para la observación, en laboratorios con menos especialización se utiliza esta técnica, con la que también se obtienen buenos resultados.

Para la fijación de la muestra, se utiliza el alcohol más simple: metanol (CH₃OH), que es incoloro a temperatura ambiente, inflamable y tóxico. Para la tinción, se usa Giemsa (una combinación de eosina, azul de metileno y colorantes básicos), utilizada para todo tipo de cortes histológicos y frotis sanguíneos, en los cuales tiñe especialmente los núcleos de los glóbulos blancos.

2. MATERIAL NECESARIO

-          Muestra de sangre humana

-          Lanceta

-          Portaobjetos

-          Cubreobjetos

-      Algodón

-          Pipeta

-          Frasco lavador

-          Vidrio reloj

-          Papel de filtro

-          Rotulador permanente

-      Alcohol sanitario 96°

-          Metanol

-          Tinción Giemsa

Metanol y tinción Giemsa

-          Microscopio óptico

-          Guantes

-          Bata de laboratorio

3. HIPÓTESIS

En el microscopio óptico se podrán observar, inmersos en el plasma, glóbulos rojos en abundancia, además de glóbulos blancos, en menor cantidad. Los eritrocitos son más grandes y con un color más intenso que los leucocitos. Se podrán observar, además, algunas plaquetas dispersas, de forma irregular.

4. OBJETIVOS

-          Conocer las células sanguíneas y el plasma, sus características y sus funciones.

-          Aprender a trabajar con la técnica del frotis.

-          Observar los distintos elementos que presenta la sangre a diferentes escalas.

-          Investigar sobre los compuestos químicos con los que se trabaja.

-          Familiarizarse con la lanceta como herramienta de trabajo.

5. MÉTODO DE EXPERIMENTACIÓN

1.      Se lavan las manos y se limpia y prepara el material.

2.      Después de desinfectar con alcohol el dedo, se hace una punción en la yema de este con la lanceta y se ejerce presión con el fin que escape sangre por el orificio.

Paso 2

3.      Se colocan varias gotas de sangre entre el centro y un extremo del portaobjetos y se anotan las iniciales en este.

4.      Se procede al frotis: con el cubreobjetos, se arrastra la sangre hacia el otro extremo. Es vital hacerlo rápido para evitar que la sangre se coagule antes de que esté extendida.

5.      Se coloca la muestra sobre un vidrio reloj.

Paso 5

6.      Se aplica, con un cuentagotas, metanol para la fijación de la muestra y se espera 3 minutos.

Paso 6

7.      Se seca el exceso de metanol y se aplica, con otro cuentagotas, tinción Giemsa. Se espera 25 minutos.

Paso 7

8.      Con el frasco lavador, se elimina el exceso de tinción.

9.      Se coloca el cubreobjetos y se observa la muestra en el microscopio.

6. OBTENCIÓN DE RESULTADOS

Ocular 10x; objetivo 4x

Ocular 10x; objetivo 10x . Muestra de Beatriz Martínez y Francisco Reina

Ocular 10x; objetivo 10x . Muestra de Paula Oliver y Andrea Sánchez

7. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Se pueden observar una gran abundancia de glóbulos rojos en la muestra, poco dispersos además, en contraste con la ínfima cantidad de glóbulos blancos. El tamaño de ambos tipos de células es prácticamente igual.

Mientras que la forma de los leucocitos es prácticamente esférica, con el núcleo coloreado, los eritrocitos presentan una forma ovalada bicóncava, aunque con menos aumentos esta parece ser irregular.

Como curiosidad, la tinción Giemsa ha teñido los núcleos de los leucocitos, que han quedado de color morado rosado.

Además, como se puede observar en esta ampliación de la segunda fotografía en el punto 6, se puede observar en la muestra un linfocito, que presenta un núcleo grande y una cantidad no muy abundante de citoplasma. Se puede observar una región más oscura en la parte inferior derecha; se desconoce si esta es un orgánulo.

Se han podido distinguir plaquetas a un aumento elevado, estas presentan forma redondeada pero ligeramente irregular.

8. CONCLUSIONES

Los glóbulos rojos se encuentran en la sangre en mayor concentración que los glóbulos blancos.

Los eritrocitos y los leucocitos, en general, tienen el mismo tamaño, mientras que las plaquetas presentan una cuarta parte de este.

Los primeros tienen forma ovalada y bicóncava, mientras que los segundos y las terceras son esféricos.
Los linfocitos, un tipo de glóbulo blanco, presentan un gran núcleo en comparación con la cantidad de citoplasma.

9. ERRORES DE LA PRÁCTICA

-No se ha utilizado instrumental esterilizado ni completamente limpio.

-No se han utilizado guantes en todo momento.

-Los tiempos de aplicación de los productos no han sido exactos.

-En la primera muestra, la sangre se coaguló antes de la aplicación del metanol.

-No se ha secado el exceso de metanol después de los 3 minutos, dando lugar a una mezcla de este con la tinción. No obstante, la muestra ha obtenido el color deseado.

Error: mezcla de metanol con tinción Giemsa.

-Bien por la calidad del microscopio óptico, bien por la falta de experiencia, los resultados de la observación no han sido plenamente satisfactorios, al no poder observar las células de nuestra propia muestra con gran aumento.

-La práctica se ha tenido que repetir al no dar los resultados esperados.

10. CONFIRMACIÓN O RECHAZO DE LA HIPÓTESIS

Se confirma en parte la hipótesis en el sentido de la cantidad de glóbulos rojos y blancos, aunque se esperaba más proporción de los segundos y mayor cantidad de plasma sanguíneo. No obstante, estas células tienen un tamaño similar y, por lo que respecta a los colores, estos tienen que ver con las tinciones. Aunque no se esperaba, se han podido distinguir algunos glóbulos blancos, por ejemplo un linfocito. Se han podido observar plaquetas a grandes aumentos; estas presentan una forma esférica pero ligeramente irregular.